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                如何用酶標儀檢測黃曲霉毒素B1
                2020/7/16
                 
                  


                黃曲霉毒素B1屬于自然最強烈的致癌物質。 它一般產生于玉米,花生,巴西堅果和棉花種子中。 鑒于這種霉菌毒素的毒性,歐洲國家做出了相近的限量,對黃曲霉毒素B1的限量為2ppb,對黃曲霉毒素總量的限量為4ppb。


                使用酶標儀能夠快速而準確的檢測谷物,飼料和其他食品中的黃曲霉毒素B1。






                 


                檢測原理

                黃曲霉毒素B1檢測試劑盒應用直接競爭酶聯免疫吸附原理。

                (1)樣品提取液或黃曲霉B1標準品100ul與酶聯偶合物200ul,混合后取100ul,

                (2)加入到抗體包被的微孔中等待15分鐘,

                (3)洗板去除未參加抗原-抗體反應的黃曲霉毒素B1,

                (4)酶的底物100ul加入到微孔中,等待5分鐘,顏色變為藍色,顏色的深淺與黃曲霉毒素B1的含量成反比,

                (5)加入終止液100ul,顏色變為黃色,


                檢測步驟

                1.取固體或液體樣品5ml,加入25ml 70%的甲醇,混勻3分鐘,靜止10分鐘,過濾,收集濾液,吸取100ul濾液加100ul分析緩沖液,混勻。

                2.取出綠色的稀釋孔和無色的有抗體包被的稀釋孔各放入一個板架上。

                3.吸取200ul酶聯偶合物加入到綠色的稀釋孔,再吸取100ul標樣(0、2、5、20、50ppb),和100ul步驟1的待檢混合樣,混勻3次。

                4.然后從300ul混合物中吸取100ul加入到無色的有抗體包被的稀釋孔中,靜止15分鐘。

                5.將孔中的液體倒掉,用蒸餾水沖洗每個孔,將微孔倒置于紙巾上把水吸干。

                6. 加入100ul底物,放置5分鐘,顏色變為藍色。

                7. 加入100ul終止液,顏色變為黃色。

                8. 上機檢測,(酶標儀濾鏡450nm,示差濾鏡630nm)

                9. 稀釋倍數f:1

                10. 定量限:生奶0.002ug/kg,

                11. 牛奶或花生醬≤20ug/kg,合格,

                12. 計算公式:X= c*f


                注:

                1. 酶聯偶合物25ml :sensitive conjugate 底物15ml :substrate 終止液15ml :stop solution 分析緩沖液 15ml :assay buffer

                2. 試劑盒在使用前恢復到室溫(18~30度),使用完畢后,放入2~8度冰箱冷藏

                3. 標樣中含有毒素,致癌性,使用時戴好橡膠手套、安全眼鏡、工作服等防護裝備

                4. 在讀數前,微孔中應沒有氣泡,否則影響分析結果

                5. 標準曲線的相關系數 r ≥0.9850

                6. 嚴格遵守規定的操作時間,否則導致數據不精確



                 

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